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吗啉基氨基的生物活性实验。

  吗啉基氨基的生物活性实验。将肿瘤细胞传代,收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100μL,铺板使待测细胞调密度至5000cell/孔。将培养板移入CO2孵箱中,在37℃、5%CO2及饱和湿度条件下培养,至细胞单层铺满孔底,加入浓度梯度的药物,药物梯度稀释5个浓度,每孔加入20μLMTT溶液(5mg·mL-1,及 0.5%MTT),继续培养3~4h。待细胞呈色后终止培养,小心吸去孔内培养液。加入150μLDMSO,置摇床上低速振动10min,使结晶物充分溶解。
 
  在酶联免疫检测仪570nm 处测量各孔OD值。将所有吗啉原始数据(OD值)进行标准差(SD)分析,以各组均值替换偏差较大数据,计算出抑制率,根据药物浓度及对应抑制率应用专门软件得出IC50值。结果与讨论2.1 目标产物设计和合成 根据索拉菲尼的结构特征,以它为先导化合物,对其结构进行了改造,一共改造了3处取代的位置,即 R1、R2、R3,并且 3 处取代的位置又选择了不同的取代基。

吗啉基氨基的生物活性实验
 
  通过相互组合后,一共设计出了26个目标化合物。对于这26个目标化合物,采用通用的实验方法,都合成出来了,但合成收率有所差异,主要是由于不同取代基的影响。整体而言,R1对实验的影响比较小,而R2、R3对实验结果的影响较大。
 
  生物活性检测生物实验过程中,采用 MTT法检测目标产物对人肺癌细胞(H1975 和 A549)、人宫颈癌细胞(Hela)增殖的抑制活性。采用的阳性对照药 物为索拉菲尼和舒尼替尼(Sunitinib),整体而言,其抗肿瘤的抑制活性都比较好,但还是存在部分差异,主要是因为取代基的不同,导致药物跟受体的结合能力不同所致的。可以看出,化合物 1-3、1-4、1-7、1-8、1-13、1-14、1-25、1-26 对人宫颈癌细胞增殖的抑制活性比较好,IC50<4。22 μmol·L-1,为有效作用。化合物 1-11、1-12、1-19、1-20、1-21、1-22 对人肺癌细胞H1975和的抑制活性较好,IC50<4.45μmol·L-1,同样为有效作用,其他几个目标化合物抑制活性良好。
 
  初步构效关系研究表明,该类目标化合物对 VEGFR 2 有一定的抑制作用,但不同 R2和 R3,其抑制作用有一定区别。其中含氮原子少的化合物对人宫颈癌细胞增殖的抑制活性较好,而含氮原子多的化合物对人肺癌细胞(H1975和A549)增殖的抑制活性要好些。原因在于含氮少的化合物更容易作用于人宫颈癌细胞,反之则更容易作用于人肺癌细胞。

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